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sirna轉染實驗步驟（以24孔板為例）1．接種細胞對于貼壁細胞：轉染前一天，將細胞按照每孔1-2x10^5個細胞的量進行鋪板，使其在轉染時密度為60%-80%為佳。對于懸浮細胞：轉染當天，配制轉染試劑-核酸復合物之前，用PBS清洗細胞1-2次，用250μLOpti-MEMI減血清培養(yǎng)基(無血清)重懸細胞，在24孔板中進行細胞鋪板，細胞密度為60-80%。2．準備轉染試劑-siRNA復合物（或轉染試劑-miRNA復合物）(1)對于每孔細胞，取2μLsiRNA(20μM，DEP...

在生物醫(yī)學研究和細胞治療領域，細胞的長期保存與復蘇是至關重要的環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的細胞冷凍保存技術多依賴于含血清的培養(yǎng)基，但血清來源的不確定性及可能引入的污染，限制了其在某些領域的應用。無血清細胞存凍液作為一種新興的細胞保存解決方案，為細胞冷凍保存技術開辟了新的篇章。本文將深入探討無血清細胞存凍液的原理、優(yōu)勢及其在細胞保存領域的重要性。無血清細胞存凍液是一種專為細胞冷凍保存設計的無血清、無蛋白的保存液。它通常含有細胞保護劑，如二甲基亞砜(DMSO)、乙二醇等，這些成分能夠減少細胞在冷...

蛋白Marker即蛋白分子量標準，是幾種已知分子量的蛋白質的混合物，像“尺子”一樣用來指示蛋白質條帶的大小。在WesternBlot實驗中，蛋白Marker主要是用來指示蛋白條帶所對應的分子量大小，此外，蛋白Marker還可以用來輔助判斷蛋白轉膜是否成功或蛋白在凝膠上的電泳進度等作用，所以選擇合適的蛋白Marker也是實驗成功的重要條件之一。李記生物預染蛋白分子量標準預染蛋白在不同的緩沖體系下有不同的表觀分子量，以上2個圖片為兩種緩沖體系下的電泳示意圖。適合作為SDS-PAG...

無血清細胞凍存液的操作方法主要包括細胞的收集、離心、凍存液的加入、分裝、凍存以及后續(xù)的解凍與復蘇等步驟。以下是詳細的操作方法：一、細胞的收集與離心細胞收集：使用常規(guī)方法收集處于對數(shù)生長期的懸浮細胞或貼壁細胞。對于貼壁細胞，可以使用胰酶或EDTA等試劑進行消化，使其從培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板表面脫落，然后收集到試管或離心管中。細胞離心：將收集到的細胞懸浮液置于離心管中，進行離心處理以收集細胞沉淀。離心條件通常為1,0002,000rpm，4℃，持續(xù)35分鐘。注意，離心時應確保溫度適宜，以...

蛋白酶K，屬于一種廣譜蛋白酶，由白色念珠菌（Candidaantarctica）發(fā)酵產(chǎn)生。它能夠在較寬的pH值范圍內(nèi)（pH4-12）保持活性，且在高溫條件下（65℃）仍能穩(wěn)定工作，這種穩(wěn)定性使蛋白酶K能夠在多種實驗條件下發(fā)揮其作用，成為科研人員手中的得力助手。在分子生物學領域，蛋白酶K的應用尤為廣泛。在DNA提取過程中，蛋白酶K能夠高效地降解細胞和組織中的蛋白質，包括那些與DNA緊密結合的組蛋白，從而釋放出純凈的DNA，為后續(xù)的PCR擴增、測序等實驗提供高質量的DNA模板。此...

提到蛋白提取，大家不約而同會想到RIPA裂解液，裂解液加入樣品中，離心即可完成蛋白的提取。然而RIPA裂解液我們真的用對了嗎？RIPA裂解液是從動物細胞或組織中提取蛋白的常用裂解液，其工作原理是利用去污劑（表面活性劑）裂解細胞膜和核膜，從而獲取細胞和組織中的RIPA可溶性蛋白。RIPA裂解液的選擇RIPA裂解液中主要包含去污劑，緩沖體系，等滲體系，變性劑、穩(wěn)定劑等。其中去污劑是細胞裂解液中重要成分，是由疏水尾端基團和極性親水頭端基團組成的兩性分子，它們能夠降低水的表面張力，所...